بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيدس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوسالهها و بزهاي كشتارشده به روش PCR
فهرست
عنوان …………………………………………………..
الف- مقدمه………………………………………. ۱
ب-چکيده…………………………………………. ۳
فصل اول:کليات …………………………………… ۵
۱- تاريخچه …………………………………… ۶
۲- خصوصيات کلي مايکوپلاسما…………………………. ۶
۳- مقاومت مايکوپلاسماها…………………………… ۸
۴- طبقه بندي مايکوپلاسماها………………………… ۹
۵- طبقه بندي کلاستر مايکوئيدس……………………… ۱۲
۶- فيلوژني……………………………………… . ۱۴
۷- ساختمان ……………………………………. ۱۵
۱-۷-ساختمان مايکوپلاسما مايکوئيدس …………………… ۱۵
۲-۷- ساختمان مايکوپلاسما کاپري کولوم ………………. ۱۷
۸- بيولوژي مولکولي………………………………. ۱۹
۹- تواليهاي تکراري………………………………. ۲۳
۱۰- پروتئينهاي سطحي……………………………… ۲۵
۱۱- فاکتور حدت………………………………….. ۳۰
۱۲- آناليز پروتئين …………………………….. ۳۲
۱۳- طبقه بندي سويهها ……………………………. ۳۴
۱۴- مشخصات گونه مايکوئيدس………………………… ۳۵
۱۵- کشت و رشد گونه مايکوئيدس …………………….. ۳۸
۱۶- کشت و رشد گونه کاپري کولوم …………………… ۴۱
۱-۱۶- محيط Thiacourt ……………………………… 41
۱۷- بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان……………….. ۴۴
۱-۱۷- علائم باليني ……………………………….. ۴۵
۲-۱۷- علائم کالبدگشايي بيماري ……………………… ۴۷
۳-۱۷- پاتوژنز …………………………………… ۵۰
۱-۳-۱۷- مکانيسمهاي مقابله با دستگاه ايمني…………… ۵۳
۴-۱۷- اختصاصيت ميزبان…………………………….. ۵۷
۵-۱۷- انتقال بيماري …………………………….. ۵۸
۶-۱۷- سير همه گيري ………………………………. ۵۹
۱-۶-۱۷- مخزن…………………………………….. ۵۹
۲-۶-۱۷- راه انتقال……………………………….. ۵۹
۷-۱۷- پيشگيري و کنترل…………………………….. ۶۰
۱-۷-۱۷- اقدامات لازم براي حفاظت مناطق عاري از بيماري….. ۶۱
۲-۷-۱۷- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري………………. ۶۲
۳-۷-۱۷- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي…………….. ۶۳
۱۸- بيماري پلوروپنوموني واگير بزان ……………….. ۶۳
۱-۱۸- علائم باليني ……………………………….. ۶۴
۲-۱۸- علائم کالبد گشايي……………………………. ۶۶
۱۹- گونه مايکوپلاسما کاپريکولوم کاپريکولوم………….. ۶۹
۱-۱۹- سندروم MASKePs…………………………….. 70
۲-۱۹- علائم باليني………………………………… ۷۱
۳-۱۹- علائم کالبد گشايي……………………………. ۷۱
۴-۱۹- سندروم آگالاکتيه واگير……………………….. ۷۳
۲۰- گونه مايکوپلاسما کاپري ……………………….. ۷۳
۱-۲۰- بيماريزايي ………………………………… ۷۳
۲-۲۰- علائم کالبد گشايي……………………………. ۷۴
۲۱- سير همهگيري………………………………… ۷۵
۱-۲۱-مخزن……………………………………… .. ۷۵
۲-۲۱-راه انتقال………………………………… ۷۶
۳-۲۱-جمعيت ميزبان………………………………. ۷۷
۲۲-پيشگيري وکنترل ……………………………… ۷۷
۱-۲۲- اقدامات لازم براي محافظت مناطق عاري از بيماري…. ۷۷
۲-۲۲- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري………………. ۷۸
۳-۲۲- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي…………….. ۷۸
۲۳-واکسن…………………………………………. ۷۹
۱-۲۳-واکسن MmmLC ……………………………… 79
۲-۲۳-واکسن Mccp ………………………………… 79
۳-۲۳-واکسن Mcc ………………………………… 79 79-اختصاصيت ميزبان در کلاستر مايکوئيدس ……………… ……. ۸۰
۲۵-تشخيص افتراقي……………………………….. ۸۰
۱-۲۵-شناسايي عامل بيماري زا …………………….. .. ۸۱
۱-۱-۲۵-بررسي ميکروسکوپيک اگزوداي ريه از طريق تهيه اسمير يا برش بافتي ۸۱
۲-۲۵- تشخيص آزمايشگاهي …………………………. ۸۱
۱-۲-۲۵- روش کشت و جداسازي………………………… ۸۱
۱-۱-۲-۲۵- انتخاب نمونه ها ………………………….. ۸۲
۲-۱-۲-۲۵- آماده سازي نمونه ها ……………………. ۸۲
۳-۲۵- تستهاي بيوشيمي……………………………. ۸۳
۴-۲۵- روشهاي سرولوژي……………………………. ۸۵
۱-۴-۲۵- عوامل موثر در آزمايشات سرولوژي ……………… ۸۵
۲-۴-۲۵- تست مهاري رشد ……………………………. ۸۷
۳-۴-۲۵- تست ايمونو فلورسانس ……………………….. ۸۸
۴-۴-۲۵- تست رسوب ژلي…………………………….. .. ۸۸
۵-۴-۲۵- تست فيکساسيون کامپلمان …………………….. ۸۹
۶-۴-۲۵- تست ممانعت از هماگلوتيناسيون ……………….. ۸۹
۷-۴-۲۵- تست آگلوتيناسيون لاتکس…………………….. ۹۰
۸-۴-۲۵- تست اليزاي رقابتي………………………… ۹۱
۹-۴-۲۵- ساير تستهاي تشخيصي……………………….. ۹۴
۵-۲۵ – مشکلات روشهاي سنتي………………………… ۹۴
۶-۲۵- تشخيص با استفاده از PCR……………………. 95
فصل دوم: روش کار
۲۶- روش کار …………………………………… ۱۰۱
۱-۲۶- جمع آوري نمونه ……………………………… ۱۰۱
۱-۱-۲۶- مواد لازم………………………………….. ۱۰۱
۲-۱-۲۶- بخش جمع آوري نمونه……………………….. ۱۰۱
۳-۱-۲۶- نمونه برداري ……………………………. ۱۰۳
۲-۲۶- کشت و جداسازي نمونه ها……………………… ۱۰۴
۱-۲-۲۶- مواد لازم ……………………………….. ۱۰۴
۲-۲-۲۶- طرز تهيه محيط کشت اختصاصي براي جداسازي مايکوپلاسماي نشخوار کنندگان ۱۰۶
۱-۲-۲-۲۶- مواد لازم ……………………………… ۱۰۶
۲-۲-۲-۲۶- روش تهيه محيط کشت…………………………. ۱۰۷
۳-۲۶- استخراج DNA مايکوپلاسما…………………….. ۱۰۹
۱-۳-۲۶- روش استخراج DNA از نمونه هاي ارسالي………….. ۱۰۹
۴-۲۶- فرايند PCR ………………………………. 110
۱-۴-۲۶- مواد لازم ……………………………….. ۱۱۰
۲-۴-۲۶- آماده سازي مواد جهت واکنش PCR ………………. 112
۱-۲-۴-۲۶- افزوده سازي DNA نمونهها ……………….. ۱۱۲
۲-۲-۴-۲۶- افزوده سازي DNA کلونيهاي جدا شده………… ۱۱۵
۳-۲-۴-۲۶- تهيه مخلوط اصلي اوليه…………………… ۱۱۵
۳-۴-۲۶- پرايمرها………………………………… ۱۱۵
۴-۲۶- واکنش PCR………………………………… 117
۵-۲۶- تهيه ژل الکتروفورز ……………………….. ۱۱۸
۱-۵-۲۶- طرز تهيه محلول اتيديوم برمايد ………………. ۱۱۹
۶-۲۶- الکتروفورز …………………………………. ۱۲۱
۷-۲۶- رويت باندهاي ايجاد شده ……………………. ۱۲۲
فصل سوم: نتايج
۲۷- نتايج …………………………………….. .. ۱۲۴
۱-۲۷- جداسازي………………………………….. ۱۲۴
۱-۱-۲۷- بررسي عملکرد محيط کشت…………………….. ۱۲۴
۲-۱-۲۷- نتايج کشت نمونه هاي ارسالي ……………….. ۱۲۴
۱-۲-۱-۲۷- نتايج روز پنجم ……………………….. ۱۲۵
۲-۲-۱-۲۷- نتايج روزهفتم تا دهم……………………. ۱۲۵
۳-۲-۱-۲۷- نتايج روزپانزدهم……………………….. ۱۲۶
۲-۲۷- نتايج PCR ………………………………… 126
۱-۲-۲۷- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر جنس ………… ۱۲۶
۲-۲-۲۷- تائيد کلوني هاي جدا شده…………………… ۱۲۷
۳-۲-۲۷- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر کلاستر مايکوئيدس. ۱۲۷
۴-۲-۲۷- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه آگالاکتيه… ۱۲۸
۵-۲-۲۷- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه مايکوئيدس کلوني بزرگ ۱۲۹
۳-۲۷- نتايج کالبد گشايي…………………………. ۱۳۰
۱-۳-۲۷- معيار انتخاب ……………………………. ۱۳۰
فصل چهارم: بررسي نتايج
نمودارها…………………………………………. ۱۳۱
فصل پنجم: بحث
۲۸- بحث …………………………………………. ۱۳۹
۱-۲۸- ضايعات کالبد گشايي…………………………… ۱۳۹
۲-۲۸- ميزان وقوع عفونت تنفسي مايکوپلاسما ………….. ۱۴۱
۳-۲۸- روش کشت………………………………….. ۱۴۲
۴-۲۸- روش PCR ………………………………… 147
۵-۲۸- فراواني گونه ها ………………………….. ۱۵۲
۲۹- خلاصه انگليسي……………………………….. ۱۵۹
۳۰- منابع …………………………………….. .. ۱۶۰
فهرست تصاوير
عنوان …………………………………………………………
تصوير شماره ۱: کلوني تخم مرغي شکل مايکوپلاسما پس از سومين ساب کالچر ۱۲۵
تصوير شماره ۲: آزمايش PCR براي تشخيص جنس مايکوپلاسما در نمونه ريه ۱۲۷
تصوير شماره ۳: آزمايش PCR براي تشخيص کلاستر مايکوئيدس در نمونه ريه ۱۲۸
تصوير شماره ۴: آزمايش PCR براي تشخيص گونه آگالاکتيه درنمونه ريه ……………………………………… ……………………………………… ……………………………………… ……………………………………… ۱۲۹
تصوير شماره ۵: آزمايش PCR براي تشخيص گونه مايکوئيدس مايکوئيدس کلوني بزرگ ۱۳۰
فهرست جداول
عنوان ……………………………………………………………………….
جدول۱: طبقه بندي مايکوپلاسما……………………….. ۱۱
جدول ۲: معرفي اعضا کلاستر مايکوئيدس و خصوصيات بيماريزايي آنها ۱۱
جدول ۳: احتياجات غذايي براي رشد مايکوپلاسماهاي کلاستر مايکوئيدس ۳۹
جدول ۴ : مقادير موردنياز جهت تهيه مخلوط اصلي اوليه…. ۱۱۲
جدول ۵: مواد مورد نياز واکنش تکثير ………………. ۱۱۴
جدول۶ : پرايمرهاي استفاده شده در واکنش تکثير ……… ۱۱۶
جدول ۷ : برنامه واکنش پرايمرها ………………….. ۱۱۸
جدول۸: : فرمول تهيه محيط TBE(5X)…………………. 120
جدول۹: ميزان اتيديوم برومايد مصرفي جهت ساختن مقادير متفاوت ژل ۱۲۰
فهرست نمودارها
عنوان ……………………………………………………………………
نمودار شماره ۱: درصد مايکوپلاسماي جدا شده به روش کشت در عفونت تنفسي
گلههاي مورد مطالعه……………………………. ۱۳۲
نمودارشماره ۲: درصد حضور مايکوپلاسما درعفونت تنفسي گلههاي مورد
مطالعه به روشPCR …………………………….. 132
نمودار شماره۳ : مقايسه روشهاي کشت و PCR در تشخيص مايکوپلاسما ي موجود در عفونت تنفسي گلههاي مورد مطالعه…………………. ۱۳۳
نمودار شماره۴: مقايسه نتايج کشت وPCR نمونهها در گلههاي مورد مطالعه (n=100) ۱۳۳
نمودار شماره ۵: مقايسه نتايج کشت و PCR مايکوپلاسما در گاو (n=50) ۱۳۴
نمودار شماره ۶: مقايسه نتايج کشت و PCR مايکوپلاسما در گله هاي گوسفند (n=30) 134
نمودار شماره ۷: مقايسه نتايج کشت و PCR در گلههاي بز (n=20) ۱۳۵
نمودار شماره۸: نمودار شماره ۸:مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما در گلههاي مورد مطالعه (n=100) ………… 135
نمودار شماره ۹: نمودار شماره۹:مقايسه نتايج ايجاد کدورت در محيط براث و جداسازي مايکوپلاسما در گلههاي مورد مطالعه (n=100) …. 136
نمودار شماره ۱۰: نمودار شماره۱۰: مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما
در گلههاي گاو(n=50)……………………………. 136
نمودار شماره ۱۱: نمودار شماره ۱۱:مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما
در گلههاي بز (n=20)……………………………. 137
نمودار شماره۱۲: مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما در گلههاي گوسفند (n=30) …………………………. 137
پروژه بررسی عفونت ریوی مایکوپلاسمایی ناشی از مایکوپلاسما در گوسالهها و بزهاي به روش PCR
قیمت : 8000 تومان